pcr反应哪一步要循环?还是变性、退火、延伸整个一起循环?

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/05/19 11:32:57

1、预变性（Initial denaturation）　　模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要,建议加热时间参考试剂说明书,一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟.
2、循环中的变性步骤　　循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性,可能的情况下可缩短该步骤时间
　　变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败.
3、引物退火（Primer annealing）　　退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度.然后在此次实验基础上做出预估.
　　退火温度对PCR的特异性有较大影响.
4、引物延伸　　引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）.但在扩增长度较短且退火温度较高时,本步骤可省略
　　延伸时间随扩增片段长短而定,一般推荐在1000bp以上,含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp.
5、循环数　　大多数PCR含25-40循环,过多易产生非特异扩增.
6、最后延伸　　在最后一个循环后,反应在72℃维持5-15分钟．使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链.
其中第2到第4步要循环即变性、退火、延伸都要循环

关于PCR的问题?问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的 PCR变性温度是多少?退火、延伸、复性分别是多少? 做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应? 做PCR反应为什么在循环开始前要热变性5min再正式进入第一次的循环如何用PCR技术检测酵母菌?如何选择引物?变性、退火、延伸的温度设置为多少比较合适,Buffer? 在三羧酸循环中,有底物水平的磷酸化的是哪一步反应? PCR说法不正确的是 A PCR的基本步骤为变性退火延伸B也需要模板DNA RNA C DNA聚合酶参加 D不需要引物 PCR程序中的退火温度和循环次数受哪些因素影响在PCR循环之前需要进行一次预变性,目的是：如何确定pcr反应中最佳循环数 PCR反应的循环前和循环后的温度和时间设计pcr体系质粒扩增扩增片段1.8kb两引物都是87碱基pfu酶怎样设计预变性变性退火延伸的时间和温度我的引物g