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提取植物总RNA,是包括了mRNA,rRNA,tRNA吗?那mRNA应该也是有很多种吧?那用olig(dT)反转录得到什

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/06/11 12:28:29
提取植物总RNA,是包括了mRNA,rRNA,tRNA吗?那mRNA应该也是有很多种吧?那用olig(dT)反转录得到什么?
提取植物总RNA,是包括了mRNA,rRNA,tRNA吗?那一个基因转录一个mRNA,所以mRNA也是有不同序列不同大小的好多条 那用olig(dT)反转录的话得到的CDNA也是有好多种的喽?
是的.
总RNA应该包括mRNA,mRNA前体,核RNA和核糖体RNA.或者换个说法就是编码RNA和非编码RNA.你说的基本正确,但tRNA通常不包括在内.
cDNA文库是通过细胞中的RNA反转录得到DNA,所以这个方法实际上是检测DNA的转录情况.也就是说,cDNA就是细胞中发生转录的DNA,是很多条长度不同的DNA.
再问: 那在已知一个基因的cDNA序列的时候我想要克隆这个基因的话,,是要先提植物的总RNA,然后用olig(dT)反转录成许多cDNA(其中应该包括目的基因的),,然后再根据已知的目的基因的cDNA序列设计特异的引物,在许多cDNA片段中扩增出自己想要的基因。 你好,请问我的整个理解对吗?
再答: 大体上是这个思路,在很多实验室,都会把之前做出来的比较常用的cDNA文库保存起来,用起来很方便。
再问: 这个基因的cDNA序列先是电子克隆得到了,然后RT—PCR验证,测序得到另一个序列,两个有区别,但大体一样,长度差好多,那是以哪个为准呢??? 那这个引物是怎么根据cDNA设计的呢?嘿嘿,不好意思啊,问的有点多,好多搞不明白的~~~··~~~辛苦了!
再答: 我前面提到了mRNA和mRNA前体,这两个的确有可能都出现在全RNA中,也可以得到相应的cDNA,长度可能会出现不同。 我觉得还是应该以测序为准,毕竟我们需要的还是可以直接参与构建的基因,能看到序列然后进行对比还是最把握的。 我以前做的全是有现成的cDNA文库,引物也都是实验室经常用的,那段时间一直在做那个蛋白,还真就单独设计过引物。应该和不同的PCR过程差别不大。