作业帮PCR扩增目的基因以后,怎么用琼脂糖电泳回收及纯化呢?希望高手指教!
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/06/11 10:46:26
PCR扩增目的基因以后,怎么用琼脂糖电泳回收及纯化呢?希望高手指教!
一般购买纯化试剂盒进行纯化.以Takara公司的试剂盒为例：
1.使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶,然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳.
2.在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶,用纸巾吸尽凝胶表面的液体.此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶,尽量减小凝胶体积,提高DNA回收率.
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下,以防止DNA损伤.
3.切碎胶块.胶块切碎后可以加快胶块融化时间,提高DNA的回收率.
4.称量胶块重量,计算胶块体积.计算胶块体积时,以1 mg=1 μl进行计算.
5.向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer,DR-I Buffer的加量如下表：
凝胶浓度
DR-I Buffer使用量
1.0％
3个凝胶体积量
1.0％～1.5％
4个凝胶体积量
1.5％～2.0％
5个凝胶体积量
6.均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热）.此时应间断振荡混合,使胶块充分融化（约6～10分钟）.
注）胶块一定要充分融化,否则将会严重影响DNA的回收率.
7.向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer,均匀混合.当分离小于400 bp的DNA片段时,应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇.
8.将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上.
9.将上述操作7的溶液转移至Spin Column中,12,000 rpm离心1分钟,弃滤液.
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次,可以提高DNA的回收率.
10.将500 μl的Rinse A加入Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液.
11.将700 μl的Rinse B加入Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液.
注）请确认Rinse B中已经加入了指定体积的100%乙醇.
12.重复操作步骤11.
13.将Spin Column安置于Collection Tube上,12,000 rpm离心1分钟.
14.将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入25 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟.
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率.
15.12,000 rpm离心1分钟洗脱DNA.
1.使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶,然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳.
2.在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶,用纸巾吸尽凝胶表面的液体.此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶,尽量减小凝胶体积,提高DNA回收率.
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下,以防止DNA损伤.
3.切碎胶块.胶块切碎后可以加快胶块融化时间,提高DNA的回收率.
4.称量胶块重量,计算胶块体积.计算胶块体积时,以1 mg=1 μl进行计算.
5.向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer,DR-I Buffer的加量如下表：
凝胶浓度
DR-I Buffer使用量
1.0％
3个凝胶体积量
1.0％～1.5％
4个凝胶体积量
1.5％～2.0％
5个凝胶体积量
6.均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热）.此时应间断振荡混合,使胶块充分融化（约6～10分钟）.
注）胶块一定要充分融化,否则将会严重影响DNA的回收率.
7.向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer,均匀混合.当分离小于400 bp的DNA片段时,应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇.
8.将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上.
9.将上述操作7的溶液转移至Spin Column中,12,000 rpm离心1分钟,弃滤液.
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次,可以提高DNA的回收率.
10.将500 μl的Rinse A加入Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液.
11.将700 μl的Rinse B加入Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液.
注）请确认Rinse B中已经加入了指定体积的100%乙醇.
12.重复操作步骤11.
13.将Spin Column安置于Collection Tube上,12,000 rpm离心1分钟.
14.将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入25 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟.
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率.
15.12,000 rpm离心1分钟洗脱DNA.
PCR扩增目的基因以后,怎么用琼脂糖电泳回收及纯化呢?希望高手指教!
pcr扩增,这张DNA琼脂糖电泳图怎么了?
用PCR技术进行目的基因扩增
PCR产物电泳做胶回收不也得到纯化的目的?PCR产物纯化试剂盒的好处是什么?
问个很菜的问题：在跑完pcr以后目的基因已经扩增了很多了,然后再切胶纯化后应该就可以用来去测序了,为什么还要进行后面的连
在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么?
大肠杆菌转化后做菌落pcr一直p不出带是怎么回事?麻烦高手指教下pcr体系及反应时的程序,目的基因大概1000bp
PCR技术如何获取目的基因呢,另外PCR的过程为什么会扩增出不同长度的链
做PCR扩增,电泳图该怎么分析啊?
PCR扩增实验之后,产物用琼脂糖凝胶电泳,为什么看不到光带?添加试剂没有问题
PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳是一回事吗
目的基因与载体结合需要ATP吗,那用PCR技术扩增时需要吗